1.材料準備
底板及墊料選擇:選取合適的底板,如塑料或硬質紙板等,作為檢測卡的基礎支撐。同時準備樣品墊、玻璃纖維膜、硝酸纖維素膜和吸水墊等材料,確保它們的質量符合要求且相互匹配。
抗體與配體準備:準備好玉米赤霉烯酮的特異性抗體、羊抗鼠抗體(用于質控線包被)、熒光微球標記的玉米赤霉烯酮單克隆抗體以及相關的抗原、偶聯劑等生物試劑。這些試劑的活性和純度對檢測卡的性能至關重要。
化學試劑與緩沖液配制:配置各種所需的化學試劑,如碳二亞胺(EDC)、N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)等用于蛋白偶聯反應;準備不同 pH 值的緩沖液,如磷酸鹽緩沖液(PBS)、MES 緩沖溶液等,用于調節反應體系的酸堿度。
2.硝酸纖維素膜處理
檢測線包被:將玉米赤霉烯酮半抗原-載體蛋白偶聯劑通過特定的方法固定在硝酸纖維素膜上,形成檢測線。例如,先將玉米赤霉烯酮半抗原溶解于 DMF 中,加入 EDC,然后將制得的溶液逐滴緩慢滴加到溶解有 BSA 的 CB 溶液中,攪拌反應后,再用 PBS 透析,得到 ZEAO 偶聯產物,將其包被于硝酸纖維素膜上形成檢測線。
質控線包被:將羊抗鼠抗體包被于硝酸纖維素膜上,形成質控線,以監測檢測過程中試劑的有效性和操作的正確性。
3.乳膠微球與抗體偶聯
乳膠微球預處理:在乳膠微球中加入 MES 緩沖溶液,混勻后離心洗滌,去除雜質和未反應的基團。
抗體偶聯:按照一定的比例將 NHS 和 EDC 加入到乳膠微球中,混勻后孵育一段時間,使乳膠微球表面活化。然后離心洗滌、去上清液,加入 ZEA 抗體至終濃度為 0.6mg/mL,混勻后反應一段時間。再次離心去除上清,用 2%的 BSA 進行封閉和清洗,最后將乳膠微球懸浮于儲存緩沖溶液中,混勻并保存于冰箱中備用。
4.組裝與干燥
組件粘貼固定:將樣品墊、已包被好的硝酸纖維素膜和吸水墊依次粘貼固定在底板上,確保各組件之間緊密連接且位置準確,避免出現氣泡或縫隙。各組件的長度和搭接寬度需符合設計要求,以保證檢測過程中液體能夠順利通過毛細管作用在各組件間流動。
干燥處理:將組裝好的檢測卡在一定溫度下進行烘干過夜處理,使各組件之間的粘貼更加牢固,同時也有利于去除殘留的水分和有機溶劑。
